Pytanie:
Zalecane aplikacje dla komercyjnych przeciwciał
walkytalky
2011-12-17 18:29:29 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Komercyjni dostawcy przeciwciał pierwszorzędowych dla danych docelowych białek zazwyczaj wymieniają zalecane zastosowania, w przypadku których prawdopodobnie wykazano, że przeciwciało działa. Zwykle chcę ich użyć do immunofluorescencji, a moje wrażenie (które wprawdzie może opierać się na niereprezentatywnej próbce) jest takie, że większość przeciwciał jest zalecana tylko do stosowania z Western Blotting.

Dlaczego? Czy WB jest najpopularniejszą aplikacją? Najbardziej ogólne? Czy łatwiej jest przetestować niż JEŚLI?

A może bardziej na temat, jak poważnie należy traktować te zalecenia? Jeśli przeciwciało nie jest zalecane dla IF, czy to oznacza, że ​​prawdopodobnie nie zadziała? Albo że może dobrze, ale nikt nie zawracał sobie głowy sprawdzaniem? Albo że prawie na pewno tak będzie?

Dwa odpowiedzi:
#1
+7
nico
2011-12-18 16:18:27 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Może WB jest im łatwiejsze do przetestowania?

Ogólnie jednak radzę sprawdzić, czy dostarczają referencji na papierze przy użyciu tych przeciwciał i spojrzeć na obrazy na papierze.

Uważaj, pokładając zaufanie w zdjęciach dostawcy, widziałem oczywiście obrazy w Photoshopie na komercyjnych stronach internetowych. Zawsze sprawdzaj również dokumenty, do których się odwołuje, ponieważ czasami nie używają one tego samego produktu, który jest sprzedawany ...

Poza tym, z mojego doświadczenia, polecana aplikacja jest po prostu taka: zalecana. Przeciwciało może równie dobrze działać w innych zastosowaniach. Mimo to należy zauważyć, że istnieje uzasadnienie dla przeciwciała działającego na WB, a nie IHC, na przykład: perfuzja ze stabilizatorami, takimi jak PFA, zmieni strukturę 3D docelowego białka i może maskować (lub ujawnij) pewne epitopy, więc przeciwciało może być mniej lub bardziej wydajne w zależności od tego, z jaką formą białka masz do czynienia (natywne, utrwalone w PFA, utrwalone w aldehydzie glutarowym, zdenaturowane SDS itp.)

#2
+3
Naofumi Kagami
2011-12-22 07:22:32 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Przeciwciała przeciw WB i IF mają zasadniczo różne wymagania dotyczące struktury epitopu. Przeciwciała przeciw WB rozpoznają zdenaturowane struktury rozszerzone przez traktowanie SDS. Przeciwciała dla IF często będą musiały rozpoznać natywną strukturę.

W zależności od dostawcy, niektórzy będą mieli dużo przeciwciał dla IF. Proponuję jeszcze trochę się rozejrzeć.



To pytanie i odpowiedź zostało automatycznie przetłumaczone z języka angielskiego.Oryginalna treść jest dostępna na stackexchange, za co dziękujemy za licencję cc by-sa 3.0, w ramach której jest rozpowszechniana.
Loading...